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荧光标记是研究细胞凋亡的最基本方法。细胞凋亡的形态学变化及生化学变化都可以通过荧光标记的的方法而检测出来，从而区别鉴别出正常细胞、坏死细胞或检测细胞周期。

碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为536nm和617nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，坏死细胞呈强红色荧光。采用流式细胞仪检测细胞周期时，凋亡细胞因内源性核酸酶被激活，使DNA广泛降解、断裂，DNA结构发生剧变，随着凋亡的进程，DNA断裂产生的小分子量DNA溢出胞外，细胞总DNA量降低，于正常G0/G1细胞群前出现一DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰(sub-G1)或称A0细胞群，即凋亡细胞群。用本试剂盒的PI直接对细胞DNA染色后，进行流式细胞仪分析，即可检测到凋亡细胞DNA的变化。

1. 荧光显微镜观察(坏死)
   
   1. 收集细胞，10mM PBS，pH7.4洗涤细胞一次(离心1000rpm，5min)，加适量的PBS重悬细胞，调整细胞浓度约为10⁶/mL，再1000rpm，5min离心一次。
      
   2. 500μL PI染色液，重悬细胞；
      
   3. 室温避光放置5min后，滴加一滴到载玻片上，加盖玻片；
      
   4. 荧光显微镜，激发和发射波长分别为536nm和617nm，绿光滤光镜观察，拍照。
2. 流式细胞仪分析(周期)
   
   1. 用10mM PBS，pH7.4洗涤细胞一次(离心1000rpm，5min)，收集并调整细胞浓度为1×10⁶/mL；
      
   2. 细胞加9倍体积的70%乙醇，于4℃固定至少12小时；
      
   3. 离心收集细胞后，用PBS洗细胞除去乙醇，细胞重悬于500μL即用型PI染色液中；
      
   4. 加入RNase A(用户自备)，使其终浓度为0.25mg/mL,37℃，避光反应30min；
      
   5. 流式细胞仪或荧光光度计激发波长488nm检测。